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核酸提取(磁珠法)常見(jiàn)的六大問(wèn)題

核酸提取的方法很多，如煮沸裂解法、酚氯仿抽法、濃鹽法、陰離子去污劑法、異硫氰酸胍/苯酚法（Trizol法）、CTAB法原理（植物DNA提取經(jīng)典方法）、離心柱純化、磁珠法提取等，今天我們來(lái)看看核酸提取(磁珠法)常見(jiàn)的六大問(wèn)題，從而更好的了解磁珠法提取核酸。Q：是不是誤區(qū)越多，提取效果越好？A：不是，磁珠的主要特點(diǎn)是既可以分散于液體中，也可以在外加磁場(chǎng)作用下以固態(tài)方式和液相分離，ren何試劑體系，磁珠和液體的比例都應(yīng)該是有一定閾值的，超過(guò)一定的比例，過(guò)多的磁珠將因?yàn)闊o(wú)法均勻分散于...

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Elisa的檢測(cè)方法有哪些？

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzymelinkedimmunosorbentassay，簡(jiǎn)寫(xiě)ELISA或ELASA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。Elisa的檢測(cè)方法有哪些？讓我們一起來(lái)看看吧！常見(jiàn)的有直接法、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法基雙抗夾心法，其中直接法和競(jìng)爭(zhēng)法應(yīng)用較少，應(yīng)有最多的是雙抗夾心法，讓我們一一來(lái)看看它們是如何操作的吧！一、直接法將抗原固定于ELISA班上，然后用酶標(biāo)抗體直檢測(cè)抗原。相較于其他類(lèi)型的ELI...

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如何利用流式進(jìn)行細(xì)胞凋亡（Cell Apoptosis）分析

磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine,PS)是一種細(xì)胞膜活性物質(zhì)，正常細(xì)胞中，其位于細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層內(nèi)側(cè),在細(xì)胞凋亡的早期，PS可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面。凋亡早期：磷脂膜(PS)外翻，但是細(xì)胞膜保持完整性，因此PI（與DNA結(jié)合）染色為陰性。AnnexinV是一種磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，可以與凋亡早期外翻的磷脂膜(PS)結(jié)合。凋亡中晚期：磷脂膜(PS)外翻，但是細(xì)胞膜被破壞，AnnexinV和PI分別與磷脂酰絲氨酸和DNA結(jié)合。壞死細(xì)胞...

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Lipo3000細(xì)胞轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)

細(xì)胞轉(zhuǎn)染常用的轉(zhuǎn)染試劑很多，其中，Lipo3000深受廣大科研工作者的喜愛(ài)，那我們來(lái)看看Lipo3000細(xì)胞轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)吧！一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備Lipofectamine™3000轉(zhuǎn)染試劑（ThermoFisher）、Opti-MEM（可以用無(wú)血清的培養(yǎng)基代替）二、實(shí)驗(yàn)步驟1.接種細(xì)胞，使其在轉(zhuǎn)染時(shí)達(dá)到70–90%匯合度。注：對(duì)于HEK293，6孔板一般鋪50萬(wàn)個(gè)細(xì)胞左右。對(duì)于PC9,24孔板一般鋪5-10萬(wàn)個(gè)細(xì)胞。由于不同細(xì)胞，生長(zhǎng)狀況不太一樣，需要根據(jù)情...

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影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有哪些？

隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，細(xì)胞轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。常用于研究基因功能、基因表達(dá)調(diào)控、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗(yàn)中，其應(yīng)用非常廣泛。既然細(xì)胞轉(zhuǎn)染如此重要，那影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有哪些？讓我們一起來(lái)看看吧！一、轉(zhuǎn)染試劑不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同，因此在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前需要根據(jù)細(xì)胞特性選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑?？梢酝ㄟ^(guò)已發(fā)表文獻(xiàn)和轉(zhuǎn)染試劑提供的已成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株來(lái)進(jìn)行選擇。二、細(xì)胞狀態(tài)轉(zhuǎn)染前細(xì)胞活力和總體健康狀況是轉(zhuǎn)染產(chǎn)生變異性的重要來(lái)源。一般建...

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